關(guān)于病毒采樣管和病毒保存液
病毒采樣管:
拭子:咽拭子、鼻拭子、痰液、支氣管灌洗液、肺泡灌洗液
采樣管:采樣時使用的無RNA酶的儲存管
病毒保存液:原理-裸露RNA,保護(hù)好RNA,防止其裂解,病毒蛋白滅活喪失感染性
基礎(chǔ)改良的病毒保存液:
病毒生存需求:Eagle's基礎(chǔ)培養(yǎng)液(MEM)或Hank’s平衡鹽,或HEPES緩沖鹽,添加了病毒生存所需的鹽類、氨基酸、維生素、葡萄糖以及蛋白質(zhì),這種保存液使用酚紅鈉鹽做為指示劑,溶液pH值在6.6-8.0時溶液呈粉紅色
穩(wěn)定病毒的蛋白質(zhì)外殼:保存液中添加了必須的葡萄糖。L-谷氨酰胺和蛋白質(zhì),蛋白質(zhì)的提供形式有胎牛血 清或牛血清白蛋白,可以穩(wěn)定病毒的蛋白質(zhì)外殼
抑制細(xì)菌組分:由于保存液營養(yǎng)成分豐富,有利于病毒的成活但是也有利于細(xì)菌的生長,如果保存液中污染了細(xì)菌,則會大量敏殖,其代謝產(chǎn)物中的二氧化碳會使保存藥pH值下降,從粉紅色變?yōu)辄S色,因而大多數(shù)家都在配方中添加了抑菌劑成分,推薦使用的抑菌劑為青霉素、鏈霉素、慶大置素及多粘菌素B等,不推薦使田善氨鈉、2-甲基-4-顯噻唑啉-3-酮(MCI和5-氯-2-甲基-4-顯噻唑啉-3-酮(CMCI)等抑制劑,因?yàn)檫@些組分對PCR反應(yīng)有影響,由于這種保存液提供的樣木基本是活病毒,可以最大程度保持樣木的原始性,后續(xù)不僅可以用于病毒的核酸提取檢測,還能用于病毒的培養(yǎng)和分離。但是用于檢測時應(yīng)該注意的是必須滅活以后再進(jìn)行核酸提取純化。